Taitool神经元逆标方案

1.    AAV2Retro 非跨突触逆标

血清型2Retro是在2型血清型的基础上突变筛选得到的，最主要的是在原来外壳上的肝素结合位点中间添加了大约7个氨基酸，它比AAV2型的病毒逆标的能力提高了100多倍。

优点：在大部分环路逆标效率高，能够在上游直接表达目的基因。

缺点：不过有些环路它的标记能力有限，在一些上游表达的不均匀，跟CAV一样它对上游的感染不是通过突触传递实现的，而是对上游细胞的直接感染，可能会造成一些非特异的感染。

实验方案1：

在下游注射AAV2Retro-Cre（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），上游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）

实验方案2：

在下游注射AAV2Retro-GOI（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），在上游直接观察；

实验方案3：

在下游注射AAV2Retro-DIO-GOI（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），上游注射Cre病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）或者是上游有Cre表达的转基因鼠。

2.    AAV2Retro Plus非跨突触逆标（泰儿图独有）

血清型2Retro Plus是在2Retro型血清型的基础上增加了多个点突变，提高了病毒在运输过程中的稳定性。

优点：逆标的效率比2Retro更高，表达更均匀。

缺点：跟CAV一样它对上游的感染不是通过突触传递实现的，而是对上游细胞的直接感染，可能会造成一些非特异的感染。

实验方案1：

在下游注射AAV2Retro Plus-Cre（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），上游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）

实验方案2：

在下游注射AAV2Retro Plus -GOI（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），在上游直接观察；

实验方案3：

在下游注射AAV2Retro Plus -DIO-GOI（滴度1E+13VG/mL，体积20~50nl左右），上游注射Cre病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）或者是上游有Cre表达的转基因鼠。

3.    CAV非跨突触逆标

Canine-Adeno-Virus能够从纤维和胞体进入神经元细胞，它对神经元细胞的亲嗜性远高与胶质细胞。当CAV从纤维或末梢进入神经元细胞之后，有一部分病毒会被细胞转运到胞体中，继而表达CAV载体所携带的外源基因。

优点：CAV病毒对细胞基本没有毒性，颗粒大，扩散小，感染区域可控。适合做稀释标记。

缺点：目前用的重组CAV病毒在上游的表达能力较弱，其次在有些环路它的标记能力有限，还有它的对上游的感染不是通过突触传递实现的，而是对上游细胞的直接感染，可能会造成一些非特异的感染。

实验方案：

在下游注射CAV-Cre（滴度1E+12VP/mL，体积200nl左右），上游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）

4.    WGA-Cre表达载体

wheat-germ agglutinin 小麦凝集素蛋白，在神经元中表达后有跨突触的能力。偶联Cre蛋白的WGA，会携带Cre同时跨突触从而标记上下游神经元。

优点：可实现细胞特异上下游标记（比如用fDIO-WGA-Cre）。

缺点：在一些环路中效果不佳，上下游均有可能标记。

实验方案：

在下游注射WGA-Cre（滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右），上游注射DIO-GOI病毒（一般用血清型9型，滴度3E+12VG/mL，体积200nl左右）