免疫组织化学（IHC）实验免疫染色详细流程

IHC实验是一种常用的免疫组织化学技术，可以用于检测蛋白质在组织中的表达和定位。这期主要讲解的是IHC实验中抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗孵育、检测的详细步骤以及操作过程:

1. 将组织切片置于二甲苯中脱蜡10分钟，然后用PBS洗去二甲苯。
2. 用EDTA抗原修复液（pH9.0）在微波炉上加热至沸腾后，将切片放入修复液中，保持沸腾状态20分钟。或者用Tris-EDTA抗原修复液（pH9.0）在电炉上加热至近沸腾后，将切片放入修复液中，保持沸腾状态10-20分钟。
3. 用冷水将切片冷却至室温，然后用PBS洗去抗原修复液。

1. 加入足够量的正常羊血清或牛血清蛋白溶液，覆盖组织切片并封闭其中的未结合位点。
2. 将切片在湿盒中孵育30分钟，使血清与组织充分作用。
3. 用PBS洗去未结合的血清，然后进行一抗孵育。

1. 根据实验需求选择适当的一抗，稀释适当倍数后加入切片中，覆盖组织并封闭其中的位点。
2. 将切片在湿盒中孵育1-2小时，使一抗与组织充分作用。
3. 用PBS洗去未结合的一抗，然后进行二抗孵育。

1. 根据实验需求选择适当的二抗，稀释适当倍数后加入切片中，覆盖组织并封闭其中的一抗。
2. 将切片在湿盒中孵育1-2小时，使二抗与组织充分作用。
3. 用PBS洗去未结合的二抗，然后进行检测。

1. 根据实验需求选择适当的检测方法，如DAB染色、荧光染色等。
2. 根据检测方法加入适当的试剂，如DAB显色液、荧光染料等。
3. 在适当的条件下进行检测，观察组织的染色情况并记录结果。可以使用荧光显微镜、光学显微镜或扫描仪等设备来观察组织切片的染色情况。如果使用荧光显微镜，可以观察到荧光标记的二抗发出的荧光信号；如果使用光学显微镜，可以观察到染色的组织切片中的目标蛋白质。

      注意事项：IHC实验的每个步骤都需要严格按照规定进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。同时，实验过程中需要注意安全问题，如避免接触化学物质等。

      荧光显微镜(Fluorescence microscope) ：荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。

      荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。