Abcam抗体保存指南

本指南以abcam抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！请不时核查抗体数据表以获取特定保存建议。

 保存温度和条件

对于很多抗体而言，分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4℃。在收到抗体时，在10000×g下离心20秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl；等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。

在大多数情况下，收到抗体时在4℃下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可以接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。同样，遵照数据表上的建议是重要的。

其他特别条件：

(1)酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4℃。冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。

(2)无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。

(3)oIgG3同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势，应始终保存于4℃。

用叠氮化钠防止污染

为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02%（w/v）的终浓度。很多abcam抗体已经包含这种防腐剂，所用浓度范围为0.02至0.05%。

不使用叠氮化钠的情形：

(1)如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。

(2)叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联，应在偶联进行前除去。偶联后，抗体可保存于叠氮化钠中，除此之外，0.01%硫汞撒（硫柳汞）不含伯胺，也是可接受的替代物。

叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG的分子量为150000道尔顿（IgM为约600000）；叠氮化钠的分子量为65道尔顿。截留分子量为14000道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于4℃的磁性搅拌器上的烧杯中，每毫升抗体使用至少一升冷PBS并搅拌透析装置6小时。更换PBS两次，每次更换搅拌至少6小时。如有可能，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。

冷冻/融化损伤

(1)重复冷冻/融化循环可使抗体变性，导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。

(2)保存于-20℃对于大多数抗体是适当的；保存于-80℃无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环（以减少结霜）恰恰是应该避免的。出于相同原因，抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域，例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。

(3)有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50%的终浓度以防止冷冻/融化损伤；甘油可将凝固点降低至低于-20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的，但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性，并且我们的保证仅使用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于-80℃，因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂，则应当小心操作，以得到无菌制备物。

(4)应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，理想的浓度为1mg/ml或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言，由于稳定蛋白质会与抗体竞争，降低了偶联的效率，所以不应加入稳定蛋白质。